Kjejdahl Metoduyla Ham Protein Tayini
sw21Proteinler, aminoasitlerin zincir halinde birbirlerine bağlanmasından oluşan büyük organik bileşiklerdir. Açlık anında en son tüketilir. Kimyasal sindirimi midede başlar.
Proteinler, aminoasit yapıtaşlarından oluşan polimerlerdir. Her proteinin kendisine has özelliklerinin olmasını sağlayan özel amino asit dizilimleri vardır. Proteinlerin işlevlerinin çoğu, kendisini oluşturan aminoasitlerin özelliklerinin tayin edilmesiyle anlaşılabilir. İnsandan virüse proteinlerin oluşumunda en çok kullanılan 22 çeşit amino asit vardır.
Bu zincirde bir amino asitin karboksil grubunun bir diğerinin amino grubuna bağlanmasıyla oluşan bağ peptit bağı olarak adlandırılır. Her proteindeki amino asit dizisinin sırası bir gen tarafından tanımlanır ve genetik kod ile kodlanmıştır. Genetik kod 22 “standart” aminoasit tanımlasa da proteinlerdeki aminoasitler translasyon sonrası değişimle kimyasal olarak değişikliğe uğrar. Bu değişimler ya proteinin işlev görmeye başlamasından önce gerçekleşir ya da kontrol mekanizmalarının parçası olarak, proteinin işlevini değiştirmek için olur. Proteinler belli işlevleri yerine getirmek için beraberce de çalışabilirler ve bazıları bir araya gelip kararlı kompleksler oluşturabilir (Anonim, 2006).
KJELDAHL METODUYLA HAM PROTEİN TAYİNİ
Amaç ve Kapsam
Gıda maddelerinde kjeldahl azotu miktarını klasik kjeldahl metodu ile belirlemek (Anonim, 2007)
Yöntemin Prensibi
Hayvansal ve bitkisel maddelerin, özellikle gıda maddelerinin analizinde kjeldahl metodu, azot miktarının tayini için kullanılır. Tecrübelere göre değişik ülkelerde, değişik ürünlere ve analizcilere bağlı olarak farklı işlemler uygulanmakta olduğu, bu farklı işlemler doğru olarak uygulandığında aynı sonuçları vermekte olduğu, genellikle değişik işlemlere bağlı olarak azot tayini sonuçları arasındaki farklılığın, ürünlerin heterojenliğinden kaynaklanan farklılıktan daha az olduğu görülmektedir. Sonuç olarak kjeldahl metodu değişik cihaz ve işlemler kullanıldığında aynı sonuçlar elde edildiğinden, farklılıklar eşdeğer olarak kabul edilebilir.
Metodun prensibi, analiz için öğütülüp, karıştırmak veya benzeri işlemlerle homojen hale getirilmiş gıda örneklerinin uygun katalizörler yardımı ile derişik sülfürik asit ile 380 °C – 400°C civarında muamele edilerek organik kütlenin parçalanması, proteini oluşturan aminoasitlerin amin grubundaki ( ve protein kaynaklı olmayan diğer azot kaynaklarındaki ) NH2 formunda bulunan azotun amonyum azotuna yükseltgenmesi, amonyum azotunun da derişik NaOH ile ortamın kuvvetli alkalileştirilmesi sonucunda NH3 halinde su buharı ile birlikte destile edilerek, toplama kabındaki çözelti tarafından (borik asit veya ayarlı bir asit çözeltisi ) tutulması ve tutucu olarak borik asit kullanıldığında ayarlı bir asit çözeltisi ile, tutucu olarak ayarlı bir asit çözeltisi kullanıldığında ayarlı bir NaOH çözeltisi ile titre edilerek, azot miktarının hesaplanması ve uygun katsayılarla çarparak protein olarak ifade edilmesi ilkesine dayanır (Anonim, 2007; Anonim, 2010).
Bu yöntemde 4 aşama vardır:
Yaş Yakma: Homojenize edilmiş 2 g numune tartılır. Üzerine katalizör olarak 4,0012 g K2SO4 (susuz) ve 450 mikrolitre CuSO4 konur. Yakma işlemini hızlandırmak için bakır sülfat ve potasyum sülfat katalizör olarak kullanılıyor. Kaynama taşı atıldıktan sonra 10 ml derişik H2SO4 eklenir. Isı ayarı yapılarak(380 C’de 3 h) yakılır.
Amaç: Proteinlerin denature olmasıdır.
Nötralizasyon: Meydana gelen amonyum sülfattan [(NH4)2S04) amonyağı (NH3) serbest hale getirmek için ortama kuvvetli bir baz(NaOH) ilave etmek gerekir.
Destilasyon: Yaklaşık 40°C ye kadar soğutulan balona 50 ml destile su konur. Karıştırılır ve soğumaya bırakılır. 1 ml’ lik erlen içine 50 ml % 4 lük H3BO3 çözeltisi konur, üzerine 3–4 damla taşiro indikatör eklenerek karıştırılır(mor renk elde edilir) ve balon adaptörün ağzı sıvıya batacak şekilde yoğunlaştırıcının altına yerleştirilir.
Titrasyon: Erlen içindekiler N/10 HCI ile titre edilir (Anonim, 2010; Öncül ve Ensoy, 2010).
BİURET METODU İLE PROTEİN TAYİNİ
UDY Advantages:
milkHigh Correlation with Kjeldahl, Combustion 99+%
Direct Protein Readout (%)
Easy Operation
System can be Customized to your Needs, Budgets, etc.
Non Hazardous Chemicals
Modest Cost Per Test
Precise, Accurate and Reproducible
State of the Art Electronics and Optic System
Optional UDY “Assist” Software
Uses Proven Dye Binding Technology
Applicable to Many Different Commodities
110v or 220v 50/60 Hz Available
Milk Protein System (MKP)
Some Typical Applications:
Alfalfa
Alfalfa Haylage
Barley
Beans
Bermuda Grass
Blue Grass
Caseinate-Pwd.
Cheese-Hard
Chickpeas
Corn
Corn Silage
Cottonseed Meal
Cowpeas
Eggs
Fishmeal Gainesburger
Graham Cracker
Grass Peas
Lentils
Linseed Meal
Malted Barley
Meat – Hi Lean
Meat – Lo Lean
Milk – Fluid Prod.
Milk – Powders
Mungbeans
Mustard Meal
Mustard Seed
Oats Oat Groats
Orange Juice
Peanut Meal
Peas
Pigeon Peas
Rape Seed/Meal
Rice
Roman Meal Bread
Rye
Safflower Meal
Sesame Meal
Sorghum (Milo)
Soy Beverage
Soybean Hulls
Soybean Meal Soybeans
Sunfower Meal
Triticale
Urd Beans
Waste Water
Wheat
Wheat-Flour
Wheat Germ Meal
Wheat Gluten
Whey/Milk Based Beverages
Whey-Delactose
Whey-Fresh Pwd.
Whey-Fresh Vat
Whey-Prot. Conc.
Yeast (Torula)
Model Application Instruments & Main Accessories Needed Accuracy & Speed
MKP Protein in milk, soy, OJ & other liquids. UDY Colorimeter, Syringe Pipet, Electronic Balance. 0.02% Protein accuracy; 30 second analysis*.
MT-DP Protein in all meats & dairy products. UDY Colorimeter, Reagent Dye Dispenser, Electronic Balance, Blender & Syringe Pipet. 0.2% Protein accuracy typical; 30 second analysis*.
SSP Protein in grains, forages, etc. Single sample fast test. UDY Colorimeter, React-R-Mill, Reagent dye Dispenser, Electronic Balance, Cyclone Sample Mill. 0.2% Protein accuracy typical; 2 minute analysis*.
MSP Protein in legumes, oilseeds, etc. Multiple sample testing. UDY Colorimeter, React-R-Shaker, Reagent Dye Dispenser, Electronic Balance, Cyclone Sample Mill. 0.2% Protein accuracy typical; Average time per sample, 1 minute*.
*excluding sample preparation
NIR, FT-NIR Metodu İle Protein Tayini
Q-Interline Quant FT-NIR cihazımız; gıda, içecek, tarım ürünleri ve benzeri organik maddelerin, hızlı ve güvenilir analizini yapmanıza imkan sağlar.
Montajı ve kullanımı kolaydır, güvenilir, sabit ölçüm sonuçları verir. İlk yatırım maliyeti düşüktür.
Optimize numune alma çözümleri,
Tek cihazla birçok numune çeşidinin ölçümünü yapabilme,
Rakipsiz spektroskopik özellikler,
Dünya kalitesinde Spektrometre; Cihaz ABB Bomem platform üzerine geliştirilmiştir.
“Solid state” : teknoloji harikası lazer; bakım gerektirmez.
Kuvars halojen ışık kaynağı, ortalama 10 yıl ömürlüdür.
ZnSe “beamsplitter”, nemden etkilenmez.
Sağlam ve dayanıklı dizayn.
Quant ile birlikte seçebileceğiniz, çok geniş, numune ölçüm aksesuar yelpazesi sayesinde, hızlıca kendi aralarında modüler değişim yapan ölçüm hazneleri ve problar, spektroskopik kaliteyi garanti altına alır. Teknolojisi sayesinde, numuneler, NIR analizi ya da referans ölçüm sırasında, numune haznesinde, özellikleri bozulmadan muhafaza edilebilir.
Sabit sıcaklık, doğru sonuçlar için önem arz eder.
Yağlar, sıvılar, sabit sıcaklık sağlayan “vial” tutucu ile ölçülerek, hem numuneyi dış etkilerden korur, hem de çapraz kontaminasyona imkan vermez, ölçüm sonrası numune temizliğini de, çok kolaylaştırır.
İri taneli katılar, yem çeşitleri, özel bir cam tüpte ölçülmektedir. Cam tüp, ekseni etrafında sürekli dönüş yapmakta, böylece numunede sürekli homojenlik sağlanmakta ve ölçümlerde, stabilite ve doğruluk artmaktadır.
Bu numune kapları, düşük maliyetli ölçüm yapabilmeniz için, cam ya da Teflon malzemeden seçilebilmektedir. Patentli spiral numune haznesi, heterojen numuneler için özel dizayn edilmiş olup, numune miktarına bağlı olmaksızın, en iyi şekilde numuneyi temsil eden bir ölçüm yapılmasına imkan sağlar.
18cm² alanı taranabilen petri kaplarına oranla, tüpler, 375cm² alanda numuneyi ölçmeye imkan sağlamaktadır.
Numune, “Spiral Sampler” aksesuarı üzerinde, “Agri Tube” içinde ölçülmektedir.
Spiral SamplerNumuneler, bu tüplere kolaylıkla doldurulabilmekte ve peş peşe ölçümler için, tüpler ölçüm öncesinde numune ile doldurulup, ölçüme hazır beklenebilmektedir. Ölçüm sonrası, numune tüpleri, kolayca boşaltılıp, temizlenebilir.
Gerektiğinde; bir barkod okuyucu sisteme entegre edilip, numuneler, hızlı ve seri şekilde tanımlanabilir. Bununla birlikte, Spiral numune tüpünün, sürekli sallanma modu mevcut olup, heterojen ürünlerin, tüpün yarısına kadar doldurulup, numunenin tüp içinde iyice dağılmasını, böylece numunenin tüm içeriğinin spektrumda yer alması sağlanır. Bu şekilde, sürekli ürün karıştırılması özelliği sayesinde, numunede heterojenitenin etkisinin
azaltılması, homojen ölçüm gibi, numuneden sonuç alınması mümkün olmaktadır.
Numune Aksesuarları:
Tüm aksesuarlar, kendi aralarında hızlıca değiştirilebilir şekilde, uyumlu üretilmektedir.
Böylece, Quant sistemi, birçok numuneyi, en yüksek spektroskopik seviyede ölçebilmektedir.
Tüm büyük hacimli numune kaplarında (tank, romörk, kamyon vb.) tüm hacmi temsil eden numuneye odaklanılması mümkün olabilmektedir.
Heterojen numuneler; ölçüm sırasında hem dönüş yapmakta, hem de sallanmaktadır.
Sıvılar ve yağlar, en yüksek ölçüm performansı için 100°C’ye kadar sabit sıcaklıkta, vial kapları içinde ölçülebilmektedir.